Sesión 9 Práctica 11: Recuento de Coliformes Fecales en Placa

SESIÓN 9 PRÁCTICA 11: RECUENTO DE COLIFORMES FECALES EN PLACA
https://youtu.be/j1ppySotUbs
https://youtu.be/elHzhlypMe0
https://youtu.be/SBPjQg1MdVA

OBJETIVO

Cultivar E.coli en placa y hacer recuento de la misma.

FUNDAMENTO

Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias.
La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. 

Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-negro, con brillo metálico. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras.

Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y levaduras, pueden crecer, originando colonias incoloras y puntiformes. 

Este medio de cultivo,es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con brillo metálico), por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas, para la identificación de género y especie.

	Fórmula (en gramos por litro) Instrucciones Peptona 10.0 Suspender 37,4 g de polvo por litro de agua destilada, dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta disolución total. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C. Lactosa 10.0 Fosfato dipotásico 2.0 Agar 15.0 Eosina 0.4 Azul de metileno 0.065 pH final:7.1 ± 0.2

MATERIALES

- Medio Levine

- Asa de siembra de Digralsky

- Placas de petry

- Alcohol

- Mechero bunsen

- Micropipeta de 1ml

- Vasos de precipitado

- Agua destilada

-  4 Tubos de ensayo

- Mechero

- Gradilla

PROCEDIMIENTOS

·         - Se ponen en 4 tubos 9 ml de agua destilada

·        - Después se echa en el primer tubo, del primer tubo una vez mezclado se coge un mililitro y se echa en el segundo, se cambia de punta, se mezcla el tubo 1/100 se coge un milititro y se pasa al tubo 1/1000, se cambia de punta, se mezcla el tubo se coge un mililitro y se pasa al tubo 1/10000.

      - Posteriormente, se le introduce 0,5ml, de cada tubo en una placa diferente.

·       - Se coge el asa de Digralsky y se reparte uniformemente en la superficie del agar, hasta que se agarra y más tarde se le da le vuelta.

CALCULOS

En un octavo he contado 98 colonia tubo 1 -> E. Coli (Grandes, amarillentas)

UFC/ml = nº colonias x Din (x10)* / Din 0,5ml    -> *Cambia según el tubo del que se halla realizado(x10 tubo 1, x100 tubo 2, x1000 tubo 3, x10000 tubo 4)

Tubo 1 : UFC/ml= 98x8x10/0,5= 15680 UFC/ml de E.coli

Tubo 2, 3 ,4 no se cuentan porque son menos de 30 (deben contarse cuando hay entre 30 y 300) porque inhiben las bacterias impidiendo el crecimiento de microorganismos.

RESULTADOS

Microorganismos	Crecimiento	Características de las colonias
Escherichia coli ATCC 25922	Bueno a excelente	Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	Bueno a excelente	Mucosas, rosa púrpura, confluentes
P. aeruginosa ATCC 27853	Bueno a excelente	Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071	Bueno a excelente	Incoloras
S. aureus ATCC 25923	Pobre	Incoloras, pequeñas, puntiformes
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Pobre	Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022	Bueno a excelente	Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028	Bueno a excelente	Incoloras