SESIÓN 5 PRÁCTICA 7: ESCALA DE MCFARLAND
OBJETIVO
-Preparar
estándares para su utilización a nivel del laboratorio
-Realizar
comparaciones con cultivos inoculados con microorganismos
FUNDAMENTO
El patrón o la escala de McFarland
consiste en una serie de tubos herméticamente cerrados,previamente calibrados y
con una densidad óptica diferente originada por la aparición de unprecipitado
de sulfato de bario (BaSO4) resultante de la reacción entre el
cloruro de bario (Cl2Ba) al1,175% (0,048 M) y el ácido sulfúrico (H2SO4) al 1%
(0,36N).
Esta turbidez puede interpretarse
ópticamente o por métodos espectrofotométricos y cada una deellas se
corresponde a una concentración conocida de bacterias/ml.Para cada cepa
bacteriana hay que establecer la equivalencia entre la turbidez de cada tubo y
lamasa o la concentración de bacterias (cél/ml) que genera una turbidez
similar.
Para asegurar la densidad del estándar de
McFarland así preparado puede ser chequeado usandoun espectrofotómetro con una
celda de cuarzo de 1cm; para el estándar 0,5 de McFarland, laabsorbancia a una
longitud de onda de 625 nm puede estar entre 0,08 a 0,1.
Alternativamente, el aseguramiento del
estándar de McFarland puede ser verificado por ajuste deuna suspensión de una
cepa control (por ejemplo,E. coli ATCC 25922) a la misma turbidez,preparando
diluciones seriadas 1:10, y realizando el respectivo recuento en placa. La
suspensión así ajustada puede tener un conteo de 1,5x108ufc/ml
MATERIALES
-Tubos de ensayo con tapón
-Pipetas 10ml
-Micropipeta
-Espectrofotómetro con sus
respectivas cubetas
-Agua estéril
-Reactivos
-H2SO4 0,36M
-BaCl2 0,048M
PROCEDIMIENTOS
-Preparamos el H2SO4 y BaCl2. Sacando la molaridad.
-Seguimos la tabla para
realizar cada tubo con las medidas correspondientes:
- -Para ello usamos una micropipeta
de 100 µL para verter BaCl2 que nos puede ayudar mucho por
ser cantidades pequeñas, y una pipeta de 10 ml para el H2SO4 por ser cantidades
un poco más grandes.
- -En el tubo 1 vamos a coger
0,1 de BaCl2 y 9,9 de H2SO4 y así con todos, obteniendo un volumen final de 10
ml.
- -Preparar un tubo 0,5 que es
la mitad del tubo 1, y en el otro la diferencia de 10ml. 0,05 de BaCl2 y 9,95
de H2SO4
-Rotular los tubos es
importante para ver mejor las concentraciones y la turbidez que en este caso es
creciente.
-Una vez terminados los
tubos los dejaremos para medir la absorbancia.
MEDIDAS PREVENTIVAS
El ácido sulfúrico H2SO4 hacerlo
siempre bajo la campana.
RESULTADOS
Los resultados de la absorbancia
que de el Espectrofotómetro.
Hola disculpa , como preparia una suspensión bacteriana de 0.5 de l Escala de MacFarland
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