Sesión 7 Práctica 9: Recuento aerobios mesófilos por filtración

SESIÓN 7 PRÁCTICA 9: RECUENTO AEROBIOS MESÓFILOS POR FILTRACIÓN

OBJETIVOS

Contar las colonias de aerobios mesófilos en 100 ml, 50 ml de agua de muestra y 50 ml de agua destilada estéril (1:1) en un medio PCA, utilizando filtración al vacío.

FUNDAMENTO

La productividad de este medio, está basada en el alto contenido nutricional de sus componentes, que permite el desarrollo de las bacterias presentes en la muestra. Realizando una filtración al vacío mediante un matraz Kitasato para hacer pasar por un filtro de poro 0,45 µm el agua y se retengan los microorganismos.

El PCA(Plate Count Agar) no es un medio selectivo, es un medio muy nutritivo, para que crezca todo. Se utilizara para hacer un recuento de bacterias en el agua, como Estreptococos.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Extracto de levadura	2.5	Suspender 23,5 g en un litro de agua destilada. Calentar a ebullición con agitación constante. Distribuir. Esterilizar durante 15 minutos a 121°C.
Tripteína	5.0
Glucosa	1.0
Agar	15.0
pH final: 7.0 ± 0.2

Incubación: Durante 24-48 horas a 32-35 °C en aerobios.

 

MATERIALES Y REACTIVOS

-  Embudo 

-  Filtro reticulado

-  Probeta 100 ml

-  Pipeta Pasteur

-  Matraz Kitasato

-   Alcohol

-  Placa Petri estéril

-  Pinzas

-  Mechero Bunsen

-  Mechero

- Vasos de precipitado x2 (agua muestra, alcohol)

PROCEDIMIENTO

- Cogemos 50 ml de agua destilada estéril y 50 ml de agua de la muestra, vertimos y enrasamos en la probeta con la pipeta Pasteur.

- Ahora filtramos al vacío el agua de muestra.

- Preparación para la filtración al vacío con el Kitasato: Preparamos la bomba de vacío, matraz Kitasato y mechero Bunsen (mismo procedimiento para las filtraciones). 

- Echamos un poco de alcohol en un vaso de precipitado, agua destilada estéril en una placa Petri estéril y encendemos el mechero. 

- Mojamos las pinzas en alcohol y flameamos rápidamente en el mechero Bunsen. Tomamos el filtro y lo metemos en agua destilada estéril, retirando el papel de filtro reticulado y colocándolo sobre el matraz. 

- Flameamos las pinzas de nuevo y procedemos a verter la mezcla sobre el embudo del matraz y encendemos la bomba de vacío. 

- Una vez filtrado, volvemos a flamear las pinzas y tomamos el filtro reticulado, colocándolo, con cuidado de no dejar burbujas, sobre el medio PCA

- Ponemos nombre y fecha de la práctica en la placa para identificarla, y metemos en el horno a 37ºC.

RESULTADOS

Microorganismos	Crecimiento
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Bueno
Bacillus cereus ATCC 10876	Bueno
Escherichia coli ATCC 25922	Bueno
Lactobacillus fermentum ATCC 9338	Regular
Streptococcus agalactiae ATCC 13813	Bueno