Sesión 8 Práctica 10: Recuentos coliformes totales por filtración

SESIÓN 8 PRÁCTICA 10: RECUENTO COLIFORMES TOTALES POR FILTRACIÓN

OBJETIVO

Contar las colonias de coliformes totales en 100 ml, 50 ml de agua de muestra y 50 ml de agua destilada estéril (1:1) en un medio ENDO, utilizando filtración al vacío.

FUNDAMENTO

La presencia de bacterias patógenas como Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, etc. están en el agua destinada al consumo humano es un riesgo siempre presente, que se incrementa en las áreas de mayor densidad de la población. Este tipo de bacterias son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales. La técnica de filtración por membrana (MF) se basa en hacer pasar la muestra de agua problema a través de un filtro de membrana microporosa, en cuya superficie quedan retenidos los microorganismos. Se utilizan membranas que tienen un tamaño de poro de 0.45 micras ya que la mayoría de los microorganismos tienen un tamaño superior (diámetro).

La normativa para abastecimiento y control de calidad de agua potable de consumo público establece como análisis microbiológicos a realizar las determinaciones de: coliformes totales, coliformes fecales, gérmenes totales, estreptococos fecales y clostridios sulfito-reductores. El número de determinaciones se establece para cada tipo de análisis, si este es mínimo, normal o completo.

Los coliformes resisten la presencia de bilis en el medio de cultivo; cuando se desarrollan en ABRV, el ácido producido por la fermentación de la lactosa, ocasiona el vire del indicador rojo neutro y la precipitación de las sales biliares por lo que las colonias son color rojo oscuro y generalmente están rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas, de color rojo claro o rosa. La posibilidad de contar las colonias se fundamenta en su dispersión y separación.

 

MATERIALES Y REACTIVOS

- Vaso de precipitado x2 (agua muestra, alcohol)

- Embudo

-  Probeta 100 ml

- Pipeta Pasteur

- Matraz Kitasato

- Alcohol

- Placa Petri estéril

- Pinzas

- Mechero Bunsen

- Mechero

- Filtro reticulado

PROCEDIMIENTO

-Cogemos 100 ml de agua de muestra, vertimos y enrasamos en la probeta con la pipeta Pasteur.

-Ahora filtramos al vacío el agua de muestra.

-Preparación para la filtración al vacío con el Kitasato: Preparamos la bomba de vacío, matraz Kitasato y mechero Bunsen.

-Echamos un poco de alcohol en un vaso de precipitado, agua destilada estéril en una placa Petri estéril y encendemos el mechero.

-Mojamos las pinzas en alcohol y flameamos rápidamente en el mechero Bunsen.

-Tomamos el filtro y lo metemos en agua destilada estéril, retirando el papel de filtro reticulado y colocándolo sobre el matraz.

-Flameamos las pinzas de nuevo y procedemos a verter la mezcla sobre el embudo del matraz y encendemos la bomba de vacío.

-Una vez filtrado, volvemos a flamear las pinzas y tomamos el filtro reticulado, colocándolo, con cuidado de no dejar burbujas, sobre el medio ENDO 

-Ponemos fecha y nombre de la práctica en la placa para identificarla, y metemos en el horno a 40ºC.

CÁLCULO

UFC/ml: no importa porque salió menos de 30.

RESULTADO

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