OBJETIVOS
-Hay que ponerse en
acción y preparar medios de cultivo.
-Tipos de medio de
cultivo, saber elegirlos y utilizarlos.
Utilidad de los medios de cultivo:
- - Hay que separar y aislar microorganismos presentes en una muestra.
- -Identificar un microorganismo
problema. Se pueden obtener cultivos puros (axénicos) a partir de colonias
aisladas.
- - Conocer el tipo de
metabolismo en función de los nutrientes que utiliza.
- -Estudios macroscópicos
características de las colonias en medio sólido.
- -Realizar antibiogramas.
- -Pruebas de concentración
mínima inhibitoria (CMI).
- -Conservación de especies.
Composición de un medio de cultivo:
·
Nutrientes
energéticos:
-Fuente
de carbono: puede aparecer como sustancias muy sencillas (ácido acético,
alcohol, citrato sódico), de monosacáridos y disacáridos (glucosa, lactosa, almidón).
-Fuente
de nitrógeno: es menos energética pero necesaria. La proporcionan las proteínas,
péptidos, extractos de carne.
·
Nutrientes
no energéticos:
-Podemos
obtener el agua indispensable, ha de ser destilada para no alterar el
equilibrio de sales.
-Sales
minerales: proporcionan equilibrio osmótico para evitar la lisis o
deshidratación de los microorganismos, como sales de sodio, potasio, magnesio,
hierro.
-Fuente
de azufre: sulfatos, tiosulfatos y aminoácidos azufrados como la metionina.
-Fuente
de fósforo: en forma de fosfatos.
·
Otros
componentes:
-Agentes
solidificantes: en los medios sólidos y semisólidos. El agar, un polisacárido
obtenido de algas rojas, es el más usado. La gelatina y la albúmina apenas se
usan.
-Tampones:
para estabilizar el pH
-Indicadores
de pH: (rojo neutro, azul de
bromotimol, fenolftaleína)
-Agentes reductores: para
promover la anaerobiosis en el medio, se usa (tioglicolato sódico, ácido
ascórbico, cisteína).
-Factores
de crecimiento: para ciertas especies se necesitan ciertos compuestos
especiales, como vitaminas, purinas o pirimidinas.
-Factores
inhibidores: impiden el crecimiento de algún tipo de microorganismos. (azida sódica para Gram -, Verde Brillante para Gram
+, Sales biliares para organismos no entéricos, antibióticos.)
Tipos de medio de cultivo
-Según su consistencia:
Si son caldos (sin agar),
sólidos (con agar 15-17 gr/L, gelatina o albúmina) o semisólidos (agar 3-5
gr/L)
-Según su composición:
Siendo definidos los que se
conocen totalmente y complejos los que su composición química exacta no es
conocida y es realiza por mezclas de extractos de materiales naturales.
-Según su utilidad:
Es para medios generales o
comunes:
Para mayoría de
microorganismos poco exigentes, enriquecidos, para más exigentes añadiendo
sangre o glucosa,
-Medios selectivos: con
sustancias enriquecidas e inhibidoras para algún tipo de microorganismo.
-Medios diferenciales: Con
componentes que da información adicional por medio de reacciones bioquímicas
como son los indicadores de pH, colorantes. -Medios de transporte y conservación: para
asegurar la viabilidad de microbios desde muestra hasta el laboratorio.
Preparación de medios de cultivo
-Se pesa la cantidad del
medio que queremos efectuar en el bote
ponemos cuantos gramos son por litro, con una regla de tres se puede sacar la
cantidad si es menos o más de un litro. A continuación, disponemos los gramos de agar
en agua destilada según venga en la etiqueta del agar.
- Después se pondrán en un
tubo y podrá ser en medio
líquido o agar inclinado, así que se deja inclinado cuando se encuentra
líquido para que solidifique en esa posición.
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