Sesión 11 Práctica 13: Siembra de agua peptonada y su lectura de turbidez

SESIÓN 11 PRÁCTICA 13: SIEMBRA DE AGUA PEPTONADA Y SU LECTURA DE TURBIDEZ.

OBJETIVOS

-Siembra de agua peptonada

-Recuento de UFC mediante su absorbancia y escala de MacFarland

FUNDAMENTO

 

Agua peptonada

Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona de carne	10.0	Suspender 15 g de polvo en 1 litro de agua destilada. Mezclar bien y distribuir. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Cloruro de sodio	5.0
pH final: 7.2 ± 0.2

Incubación: Aeróbica, a 35-37 ºC durante 18-24 horas.

Se suele usar contando con un control negativo sin inocular bacterias como referencia.

Color: ámbar claro

MATERIALES

-Asa de siembra

-Mechero bunsen

-Vasos de precipitado

-Agua destilada

-Mechero

-Gradilla

-Tubos con agua peptonada

-Tubo con agua muestra

PROCEDIMIENTO

- Tenemos que tener el mechero bunsen encendido para tener esterilidad en el ambiente.

-Cogemos el tubo que vayamos a sembrar con la mano no dominante. Con la mano dominante cogemos el asa de siembra, esterilizamos la punta hasta llevar a rojo vivo.

-El tubo con agua peptonada lo abrimos, esterilizamos la boquilla y dejamos el tapón agarrado con el dedo meñique de la mano dominante, cogemos con el asa de siembra del agua de muestra y la movemos de arriba a abajo y a los lados, luego la introducimos en el agua peptonada hasta que se suelte el inóculo.

-Se esterilizar la boquilla del tubo de agua peptonada y el asa de siembra, también se vuelve a esterilizar y la dejamos, cerramos y rotulamos los tubos poniendo nombre y fecha.

Esto lo realizamos con todos los tubos de agua peptonada y los ponemos en la gradilla y lo llevamos a la estufa a 37ºC 24 horas.

- Posteriormente el agua presentará turbidez, cogemos un tubo de agua peptonada sin sembrar para contraste y le damos a auto cero y lo metemos al espectrofotómetro a 550nm y en la celda del blanco, luego, introducimos el tubo de agua peptonada sembrado y apuntamos su absorbancia.

-Ya tenemos la absorbancia del tubo de agua peptonada sembrada, ya solo tenemos que sustituirlo por la Y en la recta de calibrado que hemos hecho antes. Despejamos X y nos dará la UFC/ml.

CÁLCULOS

La abosrbancia del tubo de la muestra es de 0,400 por lo que el cáculo que debemos hacer es de:

0,400= 0,0461 + 0,069X

Despejamos la x y nos da à 5,13·10(elevado a 8)

RESULTADOS

El resultado es de 5,13·10(elevado a 8) UFC/ml

Microorganismos	Crecimiento
Escherichia coli ATCC 25922	Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Bueno
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853	Bueno
Control Negativo	Resultado
Medio sin inocular	Sin cambio